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IT21疑难降解检材DNA分析试剂盒相关问题汇总

2016-09-18

IT21疑难降解检材DNA分析试剂盒自推出以来,国内多家权威用户在实际案例中使用本试剂进行了分型和研究,解决了疑难降解DNA检材的分型难题;在此就用户关心的相关问题解答如下:

1.IT21适用于哪些检材?
无毛囊发干,陈旧性骨骼等DNA含量低或高度降解的检材;

2.IT21的原理?
IT21的分型方法是基于逆转座子(Retrotransposable Elements,RE)的多态性,逆转座子是主要在RNA转换为cDNA的过程中发挥作用的DNA序列,它位于常染色体上,大小在2-500bp,占常染色体40%左右。它是DNA表达的调控序列,包含缺失和插入的序列,每个个体间存在不同的序列,特别适合用于个体识别。

3.每套试剂盒可用于检测多少个样品?
采用推荐的25ul扩增体系,可检测50人份;
采用国内常用的10ul扩增体系,可检测100人份;

4.IT21所需设备有哪些?
IT21不需要额外购买任何设备,它适用于目前DNA实验室常规平台,例如9700/3130、3500、3500xl等。

5.采用IT21试剂盒与线粒体测序相比有哪些优势?

  • 操作简单,时间短;
  • 不需要额外设备的支持,适用于实验室常规平台;
  • 双等位基因分析系统,分析简单;

6.是否经过国内权威机构测试?
经过公安部二所,上海803,武汉市局,北京东城分局等多家机构测试。

7.为什么扩增片断可以低至60-125bp?

超短引物设计方案,上游引物(FC)可直接扩增插入或缺失位点序列,而将下游引物分为两种,一种是插入片段引物(RI),可以和部分插入序列结合,从而扩增出插入位点序列;另一种是缺失片段引物(RN),该引物只能和无插入序列的位点结合;每个位点对应三条引物,从而不用将插入序列完全扩增下来,大大降低了扩增产物的大小,增加了对高度降解检材扩增的成功率。具体如下图:

7.为什么IT2灵敏度远高于传统STR分型?

IT21的分型方法是基于逆转座子(Retrotransposable Elements,RE)的多态性,逆转座子主要在RNA转换为cDNA的过程中发挥作用,它位于常染色体上,大小在2-500bp,占常染色体40%左右。而常规STR分型是基于常染色体上的短重复序列(short tandem repeat)的多态性,短重复序列长度在100-400bp,占常染色体的10%左右。因此,基于“拷贝数”较高的逆转座子多态性的检测方法可以检测更低拷贝的DNA检材,经验证可低至30pg,理论上灵敏度相对于传统STR分型可高近百倍。